Sonderanalysen bei LADR Biofocus

Werden unerwünschte Stoffe vor, während oder nach der Produktion in den Herstellungsprozess eingebracht, so können diese Kontaminanten erheblichen Einfluss auf die Qualität des Produktes nehmen.

Neben dem Bereich der Lebensmittel- und Futtermittelproduktion gilt es unter anderem auch in der Pharmaindustrie, in der Forschung, in der Laborartikelproduktion und in analytischen Laborbereichen, Kontaminationen zu verhindern. Diese hoch sensitiven Bereiche erfordern zumeist eine spezielle Überwachung und Kontrolle mit besonderen Nachweistests.

Müssen beispielsweise Oberflächen oder Substanzen möglichst frei von humaner DNA sein, so kann durch den Nachweis menschlicher Gensequenzen,  ein Hinweis auf Kontamination mit humaner genomischer DNA gegeben werden. Die von LADR Biofocus nachgewiesene Gensequenz liegt in mehr als 100 Kopien in menschlichen Zellen vor und stellt somit ein empfindliches Maß für die Kontamination mit menschlicher genomischer DNA dar. Der Nachweis erfolgt mittels real time PCR, welche mit einer hohen Sensitivität verbunden ist. Im Besonderen kann auch ein DNA-Nachweis gemäß der ISO 18385 („Minimierung des Risikos von DNA-Kontaminationen bei Verbrauchsmaterialien, die zur Entnahme und Analyse biologischen Materials für forensische Zwecke eingesetzt werden – Anforderungen“ 2016-02-01) durchgeführt werden.

Ebenso kann die Frage nach Kontamination mit bakterieller DNA im Fokus stehen. Hier kann das LADR Biofocus Labor DNA aus einer hochkonservierten, in allen Bakterien universell vorhandenen Sequenz aus dem Gen für die 16s-ribosomale RNA  (16S rRNA) nachweisen. Der Nachweis erfolgt mittels real time PCR.    

Produkte, welche für molekularbiologische Anwendungen gedacht sind, sollten zudem frei von  Verunreinigungen mit Nukleinsäure-abbauenden Enzymen (Desoxyribonukleasen = DNasen, Ribonukleasen = RNasen) oder Substanzen, die die PCR hemmen können (PCR-Inhibitoren), sein.

Der Nachweis von DNasen und RNasen wird über deren Fähigkeit, DNA bzw. RNA abzubauen, geführt. Im Allgemeinen wird dies als Verdau bezeichnet. Vor allem in Bereichen, in denen DNA bzw. RNA die Basis eines Nachweises bilden (z.B. Nachweis von Krankheitserregern), dürfen diese nicht unkontrolliert abgebaut werden. DNase- und RNase-freie Gebrauchsartikel und -substanzen sind daher für diese Bereiche unerlässlich.

Die PCR liefert zumeist mit hoher Spezifität und Sensitivität verlässliche Ergebnisse in der Molekularbiologie. Der Gebrauch von Materialien, die keine Hemmung der PCR bewirken, ist eine der Grundbedingungen für die erfolgreiche Durchführung dieser Methode. Mittels real time PCR kann durch unsere Analytik, eine PCR-Inhibition nachgewiesen werden. 

Vor allem in medizinischen Bereichen kommen Gebrauchsartikel und –substanzen zum Einsatz,  die keine oder nur eine geringe Anzahl an Mikroorganismen enthalten. Im Europäischen Arzneibuch (Pharmakopöe) sind entsprechende Nachweis- bzw. Bestimmungsmethoden beschrieben. Unterschiedliche Testungen auf Sterilität können unter anderem genutzt werden, um Artikel vor einer Behandlung auf die Höhe der Vorverkeimung zu testen, um so ein angemessenes Maß an Behandlungsintensität festlegen zu können. Der Behandlungserfolg kann dann ebenfalls beispielsweise als Prüfung auf Sterilität oder mittels Bioburden (Bestimmung der Anzahl an Mikroorganismen) erfolgen.

Eine weitere Möglichkeit auf die Anwesenheit von potentiell pathogenen Bakterien zu prüfen, bietet der Endotoxintest. Endotoxine sind Lipopolysaccharide und fester Bestandteil der äußeren Zellmembran gramnegativer Bakterien. Werden Endotoxine freigesetzt, z.B. durch Abspaltung oder beim Absterben der Bakterien, so können diese im menschlichen Körper physiologische Reaktionen hervorrufen wie z.B. Fieber, Entzündungen, Übelkeit. Wir führen den Endotoxintest gemäß der Vorgabe der Pharmakopöe durch. Der Test dient dem Nachweis oder der Bestimmung von Endotoxinen gramnegativer Bakterien.

In analytischen Laboren ist es wichtig, dass Gebrauchsartikel keine eigenen Proteine aufweisen, da sonst die eigentliche Analyse gestört werden könnte. Für die Prüfung auf Gesamtprotein wendet LADR Biofocus eine photometrische Methode der Pharmakopöe an, die sogenannte „Bradford-Methode“. 

Diese Spezialanalysen umfassen:

Kontaminanten von Labor- und Verbrauchsartikeln

Untersuchungen auf unerwünschte Kontaminanten, die im Rahmen des Produktions- oder Transportprozesses Produkte verunreinigen und den Gebrauch der Produkte bei der Anwendung im Labor gefährden oder stören könnten.

Produkte für molekularbiologische Anwendungen

Untersuchungen auf Verunreinigungen mit Nukleinsäuren und Nukleinsäure-abbauenden Enzymen oder Substanzen, die die PCR hemmen können (PCR-Inhibitoren).

Medizinische Produkte

Untersuchungen auf Vorverkeimung sowie auf Sterilität und Endotoxine (fieberauslösende Substanzen)

Produkte für forensische Zwecke nach ISO 18385

Produkte + Produktionsumgebung (Nachweis humaner DNA mittels Realtime-PCR)

Molekularbiologische Analysen
 

• Nachweis von humaner DNA (real time PCR)
• Nachweis von bakterieller DNA (real time PCR)
• PCR-Inhibitoren (Realtime-PCR)
• Nachweis von PCR-Inhibitoren (real time PCR)

Enzymnachweise

• Nachweis von DNasen (DNA-abbauende Enzyme) (Verdau)
• Nachweis von RNasen (RNA-abbauende Enzyme) (Verdau)

Untersuchungen nach dem Europäischen Arzneibuch (Ph. Eur.)

• Mikrobiologische Prüfung nicht-steriler Produkte: Bestimmung der vermehrungsfähigen Mikroorganismen (Bioburden, Ph. Eur., Kap. 2.6.12)
• Prüfung auf Sterilität (Ph. Eur., Kap. 2.6.1)
• Prüfung auf Bakterien-Endotoxine (Ph. Eur., Kap. 2.6.14)
• Prüfung auf Gesamtprotein (Ph. Eur., Kap. 2.5.33)

Toxine von Bakterien

Challenge-Teste

mehr zum Thema Challenge Teste finden Sie auf unserer Unterseite.

Molekulare Typisierung

• STEC / EHEC
• panC-Sequenzierung
• Salmonellen - Serotypisierung

NMR

Whole Genome Sequencing